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贻贝蛋白Mgfp-5的原核表达与纯化
吕玉伟,吕亚维,杨泽熵,王睿劭,张雨靖,王英娟
西北大学生《冲+学学院/西部资源生物与现代生物技术教育部重点实验室
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摘要:

贻贝(均“g叩灬“到足丝中黏附蛋白,是一种黏合强度高、生物相容性好、 优质的生物黏合剂,可以应用于医学、表面化学、海洋工程等领域,其中富含DOPA(多巴, 3,4.二羟基苯丙氨酸)的贻贝足丝蛋白5(M/“g“//叩“而c五、footproteintype5,Mgfp- 5)显著表现出此特性。天然获取M雨巧含量低,易固化,纯化困难,越来越多学者尝试基 因工程获得黏蛋白。文中构建重组质粒pE'128a-mgfp,在大肠杆菌(rcoli)BL21 (DE3)中诱导表达出重组蛋白M雨巧。为得到高质量的M雨巧蛋白,优化了M雨巧蛋白 诱导表达参数:菌液=0.8,诱导剂异丙基.D巯基半乳糖苷(IIYI'G)O.8mmol/L, 37℃,诱导8h;优化镍离子亲和层析纯化蛋白M巧最佳条件为:ElutionBuffer的pH为 7.0,5佣mmol/L咪唑。WesternBlot鉴定到重组Mgfp-5可以特异性表达。该研究为得到 大量Mgfp-5蛋白奠定了基础,为加速黏蛋白的黏附机理及生物医学黏合剂的开发提供参 考。

关键词: 贻贝;mgfp-5基因;原核表达;优化;纯化
发表年限: 2016年
发表期号: 第3期